人胎盤生長因子（PLGF）酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒說明書

人胎盤生長因子（PLGF）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定人血清

，血漿及相關(guān)液體樣本中胎盤生長因子（PLGF）的含量。
實(shí)驗(yàn)原理：
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人胎盤生長因子（PLGF）水平

。用純化的人胎盤生長因子（PLGF）抗體包被微孔板

，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入胎盤生長因子（PLGF）

，再與HRP標(biāo)記的胎盤生長因子（PLGF）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物

，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色

。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色

。顏色的深淺和樣品中的胎盤生長因子（PLGF）呈正相關(guān)

。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人胎盤生長因子（PLGF）濃度

。
試劑盒組成：

試劑盒組成	48孔配置	96孔配置	保存
說明書	1份	1份
封板膜	2片（48）	2片（96）
密封袋	1個(gè)	1個(gè)
酶標(biāo)包被板	1×48	1×96	2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品：90ng/L	0.5ml×1瓶	0.5ml×1瓶	2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液	1.5ml×1瓶	1.5ml×1瓶	2-8℃保存
酶標(biāo)試劑	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
樣品稀釋液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
顯色劑A液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
顯色劑B液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
終止液	3ml×1瓶	6ml×1瓶	2-8℃保存
濃縮洗滌液	（20ml×20倍）×1瓶	（20ml×30倍）×1瓶	2-8℃保存

樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘

，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清

，保存過程中如出現(xiàn)沉淀

，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑

，混合10-20分鐘后

，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）

。仔細(xì)收集上清

，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心

。
3. 尿液：用無菌管收集

，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清

，保存過程中如有沉淀形成

，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行

。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時(shí)

，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）

。仔細(xì)收集上清

。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液

，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右

。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份

。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清

。保存過程中如有沉淀形成

，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后

，稱取重量

。加入一定量的PBS，PH7.4

。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?div id="4qifd00" class="flower right">

。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度

。加入一定量的PBS（PH7.4）

，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分

。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清

。分裝后一份待檢測

，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取

，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行

，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)

，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品

，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性

。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一

、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl

，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl

，混勻

；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔

，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl

，混勻

；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五

、第六孔中

，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul

，混勻

；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七

、第八孔中

，再在第七

、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl

，混勻后從第七

、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中

，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl

，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl

，濃度分別為60ng/L

，40ng/L ，20ng/L

，10ng/L， 5ng/L）

。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑

，其余各步操作相同）、待測樣品孔

。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl

，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部

，盡量不觸及孔壁

，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘

。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜

，棄去液體

，甩干

，每孔加滿洗滌液

，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次

，拍干

。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外

。
7. 溫育：操作同3

。
8. 洗滌：操作同5

。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl

，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻

，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl

，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）

。
11. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）

。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行

。
注意事項(xiàng)：
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完

，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出

，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶

，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器

，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性

，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)

，如標(biāo)本數(shù)量多

，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線

，最好做復(fù)孔

。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定

，計(jì)算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）

。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染

。
6．底物請避光保存

。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品

，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理

。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異

，以英文說明書為準(zhǔn)

。

計(jì)算：
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)

，OD值為縱坐標(biāo)

，
在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD
值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度

；再乘以稀釋
倍數(shù)

；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值
代入方程式

，計(jì)算出樣品濃度

，再乘以稀釋
倍數(shù)

，即為樣品的實(shí)際濃度。



（此圖僅供參考）

試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上

。
2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和11%

檢測范圍：
2ng/L -80ng/L

保存條件及有效期：
1.試劑盒保存：

；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月

技術(shù)支持：庫價(jià)化學(xué)(KuuJia)

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