C166 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞
Product Format: a T25 flask
Culture Properties:貼壁
Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗
Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
Application: Cells and cancer research
NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.
Components
Item |
Specifications |
a T25 flask |
2X106 |
Manual |
1 copy |
Operation steps for cell culture
1. 吸走用于培養(yǎng)基
,加入3-5mL PBS后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞
;
2. 吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA,輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細(xì)胞表面
,培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化
;
(細(xì)胞對(duì)于消化比較敏感,消化過度會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài)
,導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長(zhǎng)
。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落
,可以輕輕吹下時(shí)即可終止
,禁止消化到細(xì)胞完全漂浮?div id="d48novz" class="flower left">
;靹蚣?xì)胞時(shí)盡量輕柔
,不要吹出大量氣泡。)
3. 加入6-8ml完全培養(yǎng)基終止消化
,輕輕吹下細(xì)胞混勻
;
4. 將混勻的細(xì)胞1000rpm(約150g)離心3min,棄上清
,再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)
;
傳代比例: 不同細(xì)胞生長(zhǎng)速度不一,具體傳代比例視細(xì)胞生長(zhǎng)速度而定
,大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代
,生長(zhǎng)較慢的細(xì)胞可以1:2傳代
。
Cell cryopreservation
1.凍存液:92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO(可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇)
2.降溫步驟:4度10min,-20度2h
,-80過夜后液氮保存
。
Tips:
1. 細(xì)胞經(jīng)過運(yùn)輸后,部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片
,是正?div id="d48novz" class="flower left">