呋喃西林代謝物快速檢測試劑盒說明書

呋喃西林代謝物快速檢測試劑盒說明書

一
、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA 方法

，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原

，樣本中的殘留物呋喃西林代謝物將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗呋喃西林代謝物抗體，加入酶標(biāo)記物后

，用 TMB 底物顯色

，樣本吸光值與其所含殘留物呋喃西林代謝物的含量成負(fù)相關(guān)

，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物呋喃西林代謝物的含量

。

二、試劑盒特性

u 試劑盒靈敏度： 0.02ppb
u 孵育溫度： 25℃
u 孵育時間： 30min~15min
u 樣本檢測下限
組織 ······································· 0.1ppb
雞蛋 ······································· 0.1ppb

u 交叉反應(yīng)率

呋喃西林代謝物 100%
呋喃唑酮代謝物＜0.1%
呋喃妥因代謝物＜0.1%

5	底物A 液	7ml	白色帽
6	底物B 液	7ml	黑色帽
7	終止液	7ml	黃色帽
8	20X 濃縮洗滌液	40ml	白色帽
9	2X 濃縮復(fù)溶液	50ml	透明帽
10	衍生化試劑	10ml	黑色帽

四
、所用儀器
、試劑

具備的儀器：酶標(biāo)儀

、均質(zhì)器、振蕩器

、離心機(jī)、刻度移液管

、天平（感量 0.01g）

、氮吹儀、恒溫箱

、恒溫水浴鍋
微量移液器：單道 20~200μl、單道 100~1000μl

、多道 30~300 μl
試劑：氫氧化鈉

、K₂HPO₄·3H₂O、正己烷

、乙酸乙酯

、濃 HCl

五
、樣本前處理步驟

u 樣本處理前須知
（a）實驗中必須使用一次性吸頭

，吸取不同試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈

，必要時可對實驗器具進(jìn)行清潔

，以避免污染干擾實驗結(jié)果。

u 樣本前處理需配制

配液 1 0.1M K HPO 溶液：
2

、在 70℃水浴鍋中孵育 20min

；
3、分別加入 5ml 0.1M K₂HPO₄ 溶液

，0.4ml 1M NaOH 溶液和 6ml 乙酸乙酯

，充分振蕩 30s；
4

、在室溫下（20-25℃）4000r/min 以上離心 10min
（如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象或乙酸乙酯層不足 3ml

，在80 ℃ 水浴孵育樣品10min 并重復(fù)離心；或提高轉(zhuǎn)速和延長離心時間重復(fù)離心）

；
5

、取出 3ml 的乙酸乙酯到另一個容器中于 50℃氮氣/空氣吹干

。
6

、用 2ml 正己烷溶解干燥物，再加入 1ml 樣本復(fù)溶液充分混合 30s

；在室溫下 4000r/min 以上離心 10min

；去除上層正己烷相（如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，則去除上層正己烷后于70℃水浴10-20min

，重復(fù)離心）；
7

、取 50μl 下層用于分析

。
樣本稀釋倍數(shù): 2 倍
此方法與呋喃唑酮代謝物、呋喃它酮代謝物

、呋喃妥因代謝物

、氯霉素試劑盒可合一處理

。

六
、酶標(biāo)免疫分析程序:

u 測定前應(yīng)須知：
1、使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫
（20～25℃）

。
2

、使用之后立即將所有試劑放回 2～8℃。
3

、在ELISA 分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性

，正確的洗板操作是 ELISA 測定
個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行

，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置

。
5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品 50μl/孔到各自的微孔中

，加入酶標(biāo)記物 50μl/孔，然后再加入抗體工作液 50μl/ 孔

，用蓋板膜封板

，25℃環(huán)境中反應(yīng) 30min。
6

、將孔內(nèi)液體甩干

，用已稀釋的洗滌液 250μl/孔洗板 4～5 次

，每次間隔 15～30 秒

，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
7

、顯色：加入底物A 液 50μl/孔

，再加入底物 B 液 50μl/孔，輕輕振蕩混勻

，25℃環(huán)境中避光顯色 15min。
8

、測定：加入終止液 50μl/孔

，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于 450nm 處（建議用雙波長 450/630n m 檢測

，5min 內(nèi)讀數(shù)），測定每孔 OD 值

。

七
、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第 1 種方
法

，定量判定用第 2 種方法

。注意樣本吸光度值與其所含呋喃西林代謝物量成負(fù)相關(guān)。

1
、粗略判定：

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)

。假設(shè)樣本 1 的吸光度值為 0.3，樣本 2 的吸光度值為 1.0

，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是： 0ppb 為 2.243

；0.02ppb 為 1.816

；0.06ppb 為 1.415

；
0.18ppb 為 0.74

；0.54ppb 為 0.313；1.62ppb 為 0.155

。

2 4 程序中的要點

。
則樣本 1 的濃度范圍是 0.54ppb～1.62ppb

；樣本 2

呋喃它酮代謝物＜0.1%

u 樣本回收率

組織 95%±25%
雞蛋 95%±25%

三
、試劑盒組成

稱 11.4g K₂HPO₄·3H₂O 加去離子水溶解定溶至 500ml。
配液 2 1M HCl 溶液：
取 8.6ml 濃HCl 加去離子水定容至 100ml

。配液 3 1M NaOH 溶液：
稱 4g NaOH 加去離子水定容至 100ml
配液 4 樣本復(fù)溶液：
將 2X 濃縮復(fù)溶液用去離子水按 1：1 稀釋

。

u 樣本處理

、所有恒溫孵育過程

，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板

。

u 操作步驟：

、從 2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20～
25℃）平衡 30min 以上

，注意每種液體試劑使用前均須搖勻

。
2

、取出框架及需要數(shù)量的微孔

，將不用的微孔放入自封袋，保存于 2-8℃

。

的濃度范圍是 0.06ppb～0.18ppb

，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中呋喃西林代謝物實際濃度。

2
、定量分析

（1）百分吸光率的計算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個標(biāo)準(zhǔn)（0 標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值

，再乘以 100%

，即
B

肌肉組織、雞蛋樣本處理方法

、配液：將 40ml 濃縮洗滌液（20 倍濃縮）用去
離子水按照 1：19 稀釋（1 份濃縮洗滌液+19 份
百分吸光率（%）＝
×100%

B₀

1、稱取 1±0.05g 的均質(zhì)物

，分別加入 4ml 的蒸餾
水

，0.5ml 1M HCl 溶液和 100μl 衍生化試劑，充分振蕩 2min

；
去離子水）

，或按所需用量配制洗滌液

。
4、編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號

，每
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B₀—0ng/ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以呋喃西林代謝物標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)

，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度

，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中呋喃西林代謝物實際濃度

。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算

，更便于大量樣本的準(zhǔn)確

、快速分析。（歡迎來電索?div id="m50uktp" class="box-center"> 。?

八
、注意事項

1、室溫低于 25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫（20～
25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值偏低

。
2

、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性

，重復(fù)性不好的現(xiàn)象

。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3

、混合要均勻

，否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4

、反應(yīng)終止液為 2M 硫酸

，避免接觸皮膚

。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒

；稀釋或攙雜使用會引起靈敏度

、OD 值變化；不要交換使用不同批號的盒中試劑

。
6

、不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感

，因此要避免直接暴露在光線下

。
7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)

，應(yīng)當(dāng)棄之

。標(biāo)準(zhǔn)品 1 的吸光度值小于 0.5 時，表示試劑可能變質(zhì)

。
8

、該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為 25℃

，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化

。

九、儲藏條件和保質(zhì)期

、儲藏條件：試劑盒于 2～8℃保存

，不要冷凍。
2

、保質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為 1 年

，生產(chǎn)日期見包裝盒

。

提示：酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣
，酶標(biāo)板仍然正常有效，不影響實驗結(jié)果
，請放心使用
。

需要更詳細(xì)的產(chǎn)品信息請聯(lián)系研謹(jǐn)生物客服.

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u 樣本前處理需配制

六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

七、結(jié)果判定

1、粗略判定：