一 樣品準備
1 細胞樣品：將需要抽提的蛋白的細胞從培養(yǎng)箱中取出，吸去培液，適量預冷的1×PBS洗滌2次，吸去PBS，加入含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑的裂解液，4℃充分裂解細胞，將細胞刮入1.5ml EP管中，95℃以上加熱10分鐘，12000g離心 10 分鐘，取上清，進行蛋白質定量后貯存于 -80℃冰箱。
2 組織樣品：
新鮮組織：將組織剪成細小的碎片，按每20mg組織加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液（裂解液中加入蛋白酶和磷酸酶抑制劑），勻漿器勻漿直至完全裂解。裂解后的樣品4℃ 12000g 離心15分鐘，取上清，進行蛋白質定量后貯存于-80℃冰箱。
冷凍組織：于-80℃冰箱中取出適量的組織在液氮中迅速研磨成粉末，將研磨好的粉末轉移到含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑的裂解液的離心管中，4℃ 12000g 離心15分鐘，取上清，進行蛋白質定量后貯存于-80℃冰箱。
蛋白定量
1 標準曲線的繪制：取一塊酶標板，按照下表加入試劑

孔號	1	2	3	4	5	6	7	8
蛋白標準液（μl）	0	2	4	6	8	12	16	20
去離子水（μl）	20	18	16	14	12	8	4	0
對應蛋白濃度（μg/μl）	0	0.05	0.1	0.15	0.2	0.3	0.4	0.5

2. 根據(jù)樣品數(shù)量，將BCA試劑A與試劑B按體積比為50:1配制適量BCA工作液，充分混勻；
3. 各孔加入180μl BCA工作液