姬姆薩染色液(Giemsa Stain,1:9)
姬姆薩色素(又稱吉姆薩色素)是由天青Ⅱ與伊紅混合而成
。Giemsa 染色原理和結(jié)果與瑞氏染色基本相同
,姬姆薩染色液對胞漿著色力較強,能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度
,特 別是對血液和骨髓細胞中的嗜天青
、嗜酸性、嗜堿性顆粒
,著色清晰
,但是對胞核著色偏深, 核結(jié)構(gòu)顯色不佳,故姬姆薩染液常與瑞氏染液聯(lián)合使用
。Giemsa Stain 以進口的姬姆薩色素
、甲醇為主要原料,含特有襯染劑
,經(jīng)研磨配制而成
,能呈現(xiàn)出清晰的細胞染色效果,經(jīng)常用于組織切片
、血液和細胞涂片
、細菌、染色體顯帶
、原生動物寄生蟲等染色
。嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì),與酸性染料伊紅結(jié)合
,染粉紅色
,稱為嗜酸性物質(zhì); 細胞核蛋白和淋巴細胞胞漿為酸性
,與堿性染料美藍或天青結(jié)合
,染紫藍色,稱為嗜堿性物 質(zhì)
;中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍均可結(jié)合
,染淡紫色,稱為中性物質(zhì)
。
Giemsa Stain(1:9)由 10×儲存液和磷酸鹽緩沖液組成
,1:9 混合成工作液后
使用;亦可以分開使用
,即先用 Giemsa Stain 染色
,再經(jīng)磷酸鹽緩沖液處理,亦可以得到
滿意的染色效果
。
產(chǎn)品組成:
試劑(A): Giemsa Stain 儲存液(10×)
100ml 10ml
500ml 50ml
RT 避 光
試劑(B): 磷酸鹽緩沖液
100ml 500ml RT
自備材料:
1
、 載玻片、顯微鏡
2
、 蒸餾水
3
、 甲醇
4
、 0.1~0.5%乙酸
操作步驟(僅供參考)
:
(一)一步法涂片染色
1、Giemsa 工作液的配制:
按試劑(A):試劑(B)=1:9 混合
,即取 1 份 Giemsa Stain 儲存液(10×)加入到 9 份的磷酸
鹽緩沖液中充分混勻
,即為 Giemsa 工作液,為即用型試劑
,不易保存
,即用即配。
2
、常規(guī)方法制備血液涂片或骨髓涂片
,待涂片自然干燥后,用甲醇固定 1~3min
。
3
、將血液涂片或骨髓涂片置于染色架上,滴加 Giemsa 工作液覆蓋涂片
,室溫滴染 15~ 30min
。
4、用自來水或蒸餾水緩慢從玻片一端沖洗
。
5
嗜酸性顆粒嗜堿性顆粒中性顆粒
(二)兩步法涂片染色
1
、Giemsa 工作液的配制:
粉紅色紫藍色淡紫色
按試劑(A):蒸餾水=1:4 混合,即取 1 份的 Giemsa Stain 儲存液(10×)加入到 4 份的蒸餾水中充分混勻
,即為 Giemsa 工作液。Giemsa 工作液為即用型試劑
,不易保存
,即用即配。
2
、常規(guī)方法制備血液涂片或骨髓涂片
,待涂片自然干燥后,用甲醇固定 1~3min
。
3
、將血液涂片或骨髓涂片置于染色架上,滴加適量 Giemsa 工作液覆蓋涂片
,室溫滴染
10~15min
。
4、加入等量磷酸鹽緩沖液
,輕輕晃動載玻片
,室溫靜置 5~10min
。
5、用自來水或蒸餾水緩慢從玻片一端沖洗
。
6
、干燥、鏡檢
。
染色結(jié)果:
嗜酸性顆粒嗜堿性顆粒中性顆粒
(三)組織切片染色
1
、Giemsa 工作液的配制:
粉紅色紫藍色淡紫色
按試劑(A):試劑(B) =1:9 混合,即取 1 份 Giemsa Stain 儲存液(10×)加入到 9 份磷酸鹽緩沖液中充分混勻
,即為 Giemsa 工作液
。Giemsa 工作液為即用型試劑,不易保存
,
即用即配
。
2、新鮮組織立即置于 Regaud 固定液固定 2 天
,期間應(yīng)更換 1 次固定液
。
3、3%重鉻酸鉀固定 1 天
。
4
、流水沖洗 16 個小時或過夜。
5
、照常規(guī)脫水
、包埋。
6
、切片厚度約為 5μm
,常規(guī)脫蠟至水。
7
、蒸餾水清洗 2 次
,每次 1min。
8
、入含 Giemsa 工作液染缸
,浸染 18~24h。
9
、蒸餾水稍微清洗
。
10、0.1~0.5%乙酸洗 1~2min
。
11
、自來水稍微沖洗。
12
、用無水乙醇迅速脫水 3 次
,每次 5~10s
。
13、二甲苯透明
,中性樹脂封固
。
染色結(jié)果:
細胞核 藍色至紫色
細胞質(zhì) 淡藍色
嗜鉻細胞胞質(zhì)結(jié)締組織
黃綠色淡紅色
注意事項:
1、血液涂片或骨髓涂片應(yīng)厚薄均勻
,以免影響染色效果
。
2、涂片染色中 Giemsa 染色后
,請勿先去除染液或直接對涂片用力沖洗
。
3、如果染色過深或過淺
,應(yīng)調(diào)整染色時間或工作液濃度
。
4、涂片染色和組織切片染色中
,pH 值對染色有一定影響
,載玻片應(yīng)清潔、無酸堿污染
, 以免影響染色效果
。
5、染色液經(jīng)稀釋后液面應(yīng)金屬光澤則表示染液有染色作用
,否則染色液可能失效
。
6、組織切片染色中
,染色后需用大量 0.1~0.5%乙酸急速沖洗
,避免浮面沉淀物污染切片后難以洗脫。
7
、0.5%乙酸分化常用于 Giemsa 組織切片染色
,如有必要亦可用于細胞涂片,但其濃度應(yīng)
適量下調(diào)
。0.5%乙酸分化切片時,切片呈粉紅色即可終止
。
8
、Giemsa 組織切片染色中,無水乙醇脫水要迅速
,否則切片易褪色
。
9、涂片染色和組織切片染色中
,如需急速獲得結(jié)果
,可按 Giemsa Stain 儲存液(10×):磷酸鹽緩沖液=1:1 配制 Giemsa 工作液
,充分混勻,即為快速 Giemsa 染色工作液
,將染色液滴加于細胞涂片或組織切片上
,加熱染色,20~30s 后重新加染色液
,反復(fù) 5~10 次
,
其余步驟同上。
10
、染色液可重復(fù)使用
,但不能多次重復(fù),若有沉淀物應(yīng)過濾后使用
。
11
、Regaud 固定液: 按 3%重鉻酸鉀:甲醛=4:1 配制,臨用前混勻
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