。取每個(gè)樣品后都要更換吸頭,準(zhǔn)確記錄每個(gè)樣品在板上的位置
。每個(gè)樣品在加入到包被板微孔前應(yīng)充分混勻
。
【注意事項(xiàng)】
試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫,應(yīng)將試劑盒各組份放置室溫至少1小時(shí)以上
。使用前應(yīng)搖勻
,使用后放回2-8℃。
不同品種
、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用
,使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。
底物和終止液對(duì)皮膚和眼可能有刺激性
,使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)
。
TMB(顯色液)不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。
檢測(cè)板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中
,并盡快置于2-8℃)
。
所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。
嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得最好的結(jié)果
。操作過程中移液
、定時(shí)和洗滌等的全部過程必須精確。
血清稀釋板為一次性用品
,不得重復(fù)使用
;血清稀釋板的最大容量為300μl/孔。
【操作步驟】
取預(yù)包被的檢測(cè)板(根據(jù)樣品多少
,可拆開分次使用)
,將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測(cè)板孔中。同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照各2孔
,取陰性及陽(yáng)性對(duì)照各100μl分別加入反應(yīng)孔中輕輕振勻孔中樣品(勿溢出)
。
蓋上封板膜(可按實(shí)際需要自行裁剪),置37℃溫育30分鐘
。
小心揭開封板膜
,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul
,后甩去孔內(nèi)液體
,以上步驟重復(fù)4-6次,最后在干凈吸水紙上拍干
。
每孔加酶結(jié)合物100μl
,蓋上封板膜
,置37℃溫育30分鐘
。
小心揭開封板膜
,甩掉板孔中的溶液,洗滌4-6次, 方法同3
。切記最后在干凈吸水紙上拍干
。
每孔加顯色液100μl,輕微震蕩混勻
、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘
。
每孔加終止液50μl,使反應(yīng)終止
,10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果
。
【結(jié)果判定】
用酶標(biāo)儀于450nm(630nm作參比波長(zhǎng))讀取吸光度OD值。
試驗(yàn)成立的條件是:
陰性對(duì)照(N)OD值<0.20
,同時(shí)陽(yáng)性對(duì)照(P)OD值〉0.3
。
計(jì)算方法:
(樣品OD值-陰性O(shè)D均值)÷(陽(yáng)性對(duì)照OD均值-陰性O(shè)D均值)= IRPC值
陰陽(yáng)性判斷:
IRPC<0.4判為陰性;0.4≤IRPC<0.45判為可疑;IRPC≥0.45則判斷為陽(yáng)性
。
【有效期】
貯存方法: 2 - 8oC下貯存有效期為 12個(gè)月
。