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熱門關(guān)鍵詞：DMSO  ELISA試劑盒  胎牛血清  博來(lái)霉素 zeocin  淋巴細(xì)胞分離液  Trizol  CCK-8  胰酶  細(xì)胞

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H2S 含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

H2S 含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

可見分光光度法 正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。試劑一：液體 25mL×1 瓶

，4℃保存。試劑二：液體 15mL×1 瓶

，4℃保存

。
試劑三：液體 15mL×1 瓶

，4℃避光保存。試劑四：液體 15mL×1 瓶

，4℃保存

。
試劑五：液體 3mL×1 管，4℃避光保存

。
產(chǎn)品說(shuō)明：
H2S 是一種新型氣態(tài)信號(hào)分子

，存在于腦內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì)，生理濃度的 H2S 對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)海馬的長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)功能具有重要的調(diào)節(jié)作用

，并對(duì)自發(fā)性高血壓

、出血性休克及肝硬化等疾病的過(guò)程發(fā)揮著重要的病理生理效應(yīng)。
H2S 與醋酸鋅

、N, N-二甲基對(duì)苯二胺和硫酸鐵銨等反應(yīng)生成亞甲基藍(lán)

，亞甲基藍(lán)在
665nm 處有最大吸收峰，通過(guò)測(cè)定其吸光值可計(jì)算 H2S 含量

。
需自備的儀器和用品：
天平

、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì) 1ml 玻璃比色皿

、蒸餾水

。
操作步驟：
一、樣品處理：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織

，加入 1mL 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿

，然后 10000g，4℃離心 10min

，取上清

，置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌

、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10 4 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議
500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 提取液）

，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒

，間隔 7
秒

，總時(shí)間 3min）；然后 10000g

，4℃

，離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)

。
3. 血清（漿）：直接測(cè)定

。
二、測(cè)定步驟：（取 1.5ml 離心管，按照下表操作）

	空白管	測(cè)定管
樣品（μL）		250
H₂O（μL）	250
試劑一（μL）	250	250
充分震蕩混勻
試劑二（μL）	250	250

12000rpm ，4℃ ，離心 10min，去上清，留沉淀
H₂O（μL）	500	500
12000rpm ，4℃，離心 10min ，去上清，留沉淀
試劑一（μL）	250	250
試劑三（μL）	250	250
充分震蕩混勻
試劑四（μL）	250	250
12000rpm ，4℃ ，離心 10min，取上清
試劑五（μL）	50	50
混勻，25℃靜置20min ，于微量石英比色皿/96孔板中，空白管調(diào)零，測(cè)定665nm吸光值，記為A665。

三

、H2S 含量計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y = 0.0044x

，R2 = 0.9988
（1）組織樣品
a.按照蛋白濃度計(jì)算
H2S（μmol/mg prot）= A665÷0.0044×V 反總÷(V 樣×Cpr)×10-3=0.727×A665÷Cpr
b.按照樣本重量計(jì)算
H2S（μmol/g）= A665÷0.0044×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)×10-3 = 0.727×A665÷W
（2）液體樣本
H2S（μmol/L）= A665÷0.0044×V 反總÷V 樣= 727×A665
（3）細(xì)胞
H2S（μmol/104 cell）= A665÷0.0044×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))）×10-3
=0.727×A665÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）
V 反總：反應(yīng)總體積，0.8mL

；V 樣：反應(yīng)中樣品體積

，0.25mL；V 樣總：加入提取液體積

，1mL

；W：樣品質(zhì)量，g

；Cpr：蛋白濃度

，mg/mL。

技術(shù)支持：庫(kù)價(jià)化學(xué)(KuuJia)

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