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熱門關(guān)鍵詞：DMSO  ELISA試劑盒  胎牛血清  博來霉素 zeocin  淋巴細(xì)胞分離液  Trizol  CCK-8  胰酶  細(xì)胞

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免疫組化試劑盒使用說明書

保存方法：2-8℃保存。 有效期：一年

。 生產(chǎn)日期：見封口

。

工作原理：

辣根過氧化物酶（HRP）的分子量（40000），它不會(huì)遮蓋抗原的結(jié)合部位

，具有較高活性及特異性

，可溶性佳，生成的產(chǎn)物不擴(kuò)散

，可作用于多種底物

，產(chǎn)生不同顏色且HRP穿透力強(qiáng)，易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。DAB在 H2O2存在的情況下

，可以作為HRP的電子供體

，產(chǎn)生褐色的不溶顆粒，可作為顯色的試劑

。

試劑盒內(nèi)容：

	名稱	規(guī)格
1	0.01mol/L pH6.0枸櫞酸鹽緩沖液	1L
2	PBS緩沖液	2L
3	廣譜二抗	3mL
4	30%H2O 2	10 mL
5	DAB顯色液I	0.6mL
6	DAB顯色液II	0.6mL

自備試劑：無水乙醇

、蘇木素。

操作步驟：

1. 60℃常規(guī)脫蠟至水后

，將石蠟切片先后浸入二甲本苯Ⅰ

，二甲本苯Ⅱ各10min。然后逐級降濃度酒精入水

，每次3-5 min

。

①	無水灑精	3－5min
②	90% 酒精	3－5min
③	85% 酒精	3－5min
④	75% 酒精	3－5min
⑤	PBS洗滌3次	每次5 min

2.熱修復(fù)抗原：將切片置于0.01mol/L pH6.0枸櫞鈉緩沖液，微波爐加熱至沸騰后斷電

，間隔5-10 min后

，反復(fù)1-2 次，置于室溫自然冷卻

。0.01 mol/L pH6.0的PBS洗滌3次

，每次5 min

3.消除內(nèi)源性過氧化物酶：用3% H₂O₂ 室溫孵育 5-10 min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性

。PBS洗滌2-3次

，每次5 min；

4.滴加一抗：滴加適當(dāng)稀釋的一抗到切片上

，37℃孵育1小時(shí)左右或者4℃過夜

， pH7.4的PBS洗滌3次，每次5 min

。（一抗的稀釋度

、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系

。一般來說

，陽性染色強(qiáng)度不夠時(shí)，可提高一抗?jié)舛群脱娱L孵育時(shí)間

；背景過高時(shí)

，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間。）

5.加入廣譜二抗

，37℃孵育1小時(shí)

，取出后PBS洗滌3次，每次5 min

。

6.DAB顯色：取DAB顯色液I及II各50微升加至入1mL的水中

，配成DAB工作液

，滴加到切片上，室溫顯色

，鏡下控制反應(yīng)時(shí)間

。若無背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。蒸餾水充分洗滌以終止反應(yīng)

。

7..觀察顯色后自來水沖

，蘇木目精復(fù)染1-2min，

，自來水沖10min

，梯度酒精脫水，二甲本苯透明

，中性樹膠封片

，干燥

，分析拍照

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